Blood Direct PCR Kit

Dali nga pagpadako sa target nga gene nga direkta nga naggamit dugo ingon usa ka template nga wala makuha.

Ang kini nga kit nagsagop sa usa ka genetically engineered anti-inhibitor DNA polymerase aron episyente nga mapadako ang mga single-copy nga genes sa genome sa tawo. Ang maayo nga na-optimize nga sistema sa buffer sa kini nga kit makatabang sa polymerase nga kusganon nga makasukol sa pagdili sa mga tigpugong sa PCR, sa ingon direkta nga mapadako ang DNA nga naggamit dugo ug mga kulturang selula ingon mga template. Kini nga produkto dali gamiton ug wala magkinahanglan komplikado nga mga lakang sama sa pagputli sa DNA o sample nga pagpagwapa.
Ang kini nga kit gihatag ingon 2 × MasterMix, ug ang reaksiyon mahimo pinaagi sa pagdugang ra sa template sa dugo ug mga katugbang nga pasiuna nga pag-ila. Mahimo kini i-apply sa kulturan nga mga selula sa mga hayop nga sus-an sama sa mga tawo, ilaga, baboy, baka ug uban pang mga species, ingon man lab-as o 4 ℃ cryopreserve nga tibuuk nga dugo, anticoagulant (EDTA, citrate, heparin), liquefied clots sa dugo ug uga nga mga spot sa dugo gitipig sa Whatman 903 ug FTA Elute nga mga komersyal nga kard.

Iring Dili	Kadako sa pagpamutos
4992529	20 ×l × 100 rxn
4992530	20 µl × 500 rxn

Magpadala email sa amon

Detalye sa Produkto

Eksperimento nga Panig-ingnan

FAQ

Mga Tags sa Produkto

Mga dagway

■ Yano ug dali: ang pagpadako sa PCR mahimong direkta nga buhaton gamit ang dugo ingon template, nga dili kinahanglan ang makalaay nga mga lakang sa pag-andam sa sampol ug pagkuha sa DNA.
■ Taas nga kaputli: Ang laktawan sa sampol nga pre-treatment ug mga lakang sa pagkuha sa DNA mahimong makatabang aron malikayan ang kontaminasyon sa krus sa mga sampol.
■ Taas nga pag-agi: Ang pag-ila sa PCR alang sa daghang mga sukol nga sampol mahimo pinaagi sa paghiusa sa kit nga adunay 96/384 nga maayo nga mga plate sa PCR.
■ Kusog nga unibersalidad: Ang kini nga kit mahimong epektong makapausbaw sa taas nga mga tipik sa GC o mga tipik nga adunay komplikado nga sekondarya nga istruktura, ug ang gitas-on sa pagpadako mahimong hangtod sa 5 kb.
■ Kusug nga resistensya sa tensiyon: Kini nga kit mahimong magamit alang sa lainlaing mga lahi ug mga sampol sa dugo nga gitipig sa lainlaing paagi.

Mga aplikasyon

Ang mga produkto sa PCR sa kini nga kit adunay sulud nga "A" sa 3'-end, nga direkta nga magamit alang sa TA vector cloning. Ang kini nga kit mahimong magamit alang sa pagpadako sa mga tipik sa genomic DNA, pag-analisar sa taas nga pag-analisar sa genetiko ug pag-analisar sa genotyping (sama sa pagtuki sa gene).

Ang tanan nga mga produkto mahimong ipasibo alang sa ODM / OEM. Alang sa mga detalye,palihug i-klik ang Customized Service (ODM / OEM)

Kaniadto: TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

Sunod: Mouse Tissue Direct PCR Kit

	Gigamit ang tawo nga EDTA anticoagulation ingon usa ka template, 4 nga mga gene nga adunay lainlaing mga sulud nga GC ang gipadako sa Blood Direct PCR Kit. Ang sistema sa reaksyon sa PCR 20 μl, ug 1 μl nga dugo ang gigamit ingon nga template. M: TIANGEN Marker II; 1: Kadako sa tipik 1090 bp, sulud sa GC 68.1%; 2: Kadako sa tipik 1915 bp, sulud sa GC 70.4%; 3: Kadako sa tipik nga 448 bp, sulud sa GC nga 74.8%; 4: Kadako sa tipik 1527 bp, sulud sa GC 61.5%. Mga eksperimento nga sangputanan: Ang Blood Direct PCR Kit mahimong epektibo nga makapauswag sa mga tipik sa DNA nga adunay sulud nga GC sa gidak-on nga 61.5% -74.8%, nagsugyot nga kini mahimo nga padak-an ang mga hatag nga GC-high.
	Paggamit sa tawo nga EDTA anticoagulation ingon template, 5 nga mga gene nga adunay lainlaing gitas-on (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 ug Hn4.0) gipakusog sa Blood Direct PCR Kit. Ang sistema sa reaksyon sa PCR 20 μl, ug 1 μl nga dugo ang gigamit ingon nga template. M: TIANGEN Marker II; 1-3: 3 lainlaing mga sampol sa dugo; NTC: pagpugong nga wala’y pasiuna. Mga sangputanan nga eksperimento: Ang Blood Direct PCR Kit mahimong makadugang sa mga tipik nga adunay gitas-on hangtod sa 4 kb, nga nagsugyot nga makahimo kini sa pagpadako sa mga tag-as nga bahin.
	Gigamit ang tawo nga EDTA anticoagulation ingon usa ka template, gigamit ang Blood Direct PCR Kit alang sa pagkakita sa PCR sa lainlaing mga sampol sa dugo. Ang sistema sa reaksyon sa PCR 20 μl, ug 1 μl nga dugo ang gigamit ingon nga template. M: TIANGEN Marker II; 1-9: ang kantidad sa pag-load sa dugo mao ang 0.1 μl, 0.2 μl, 0.3 μl, 0.4 μl, 1 μl, 2 μl, 3 μl, 4 μl ug 5 μl, matag usa. NTC: kontrol nga wala’y template Mga sangputanan nga eksperimento: Ang Blood Direct PCR Kit adunay kusug nga pagbatok sa dugo ug mahimo nga padakoon ang mga sampol sa dugo nga adunay sukod sa pagkarga nga 0.1-5 μl.
	Ang mga sampol sa dugo gikan sa tawo, ilaga, manok ug uban pang mga lahi nga adunay lainlaing pagtambal gigamit ingon mga template. Gigamit ang Blood Direct PCR Kit aron mapadako ang PRNP (human, 750 bp), Actin (rat, 200 bp), ug β-Actin (Chicken, 1.0 kb). Ang sistema sa reaksyon sa PCR 20 μl, ug 1 μl nga dugo ang gigamit ingon nga template. M: TIANGEN Marker II. Mga resulta nga eksperimento: Ang Blood Direct PCR Kit mahimong magamit sa daghang mga sampol, ug ang direkta nga pagkakita sa PCR mahimo nga himuon sa mga sampol sa dugo gikan sa lainlaing mga lahi nga adunay lainlaing mga pagtambal.

T: Wala’y mga band nga nagpadako

Usa ka 1 nga Sulundan

■ Ang template adunay sulud nga mga hugaw sa protina o mga tigpugong sa Taq, ug uban pa.

■ Ang denaturation sa template dili kompleto —— Tukma nga dugangan ang temperatura sa denaturation ug ipadugay ang oras sa denaturation.

■ Pagdaot sa template —— Pag-andam usab ang template.

A-2 Pasiuna

■ Dili maayo nga kalidad sa mga pasiuna—— Pag-usab sa synthesize sa pasiuna.

■ Panguna nga pagkadaut ——Ukubua ang mga pasiunang konsentrasyon sa gamay nga kadaghan aron mapreserba. Paglikay sa daghang pagyelo ug pagkatunaw o sa dugay nga 4 ° C cryopreserve.

■ Dili husto nga laraw sa mga primer (pananglitan ang gitas-on sa primer dili igo, dimer nga gihimo taliwala sa mga primer, ug uban pa) -Redesign primers (likayan ang pagporma sa primer dimer ug sekondarya nga istraktura)

A-3 Mg²⁺konsentrasyon

■ Mg²⁺ ang konsentrasyon sobra ra kaayo --— Husto nga pagdugang sa Mg²⁺konsentrasyon: I-optimize ang Mg²⁺ konsentrasyon sa usa ka serye sa mga reaksyon gikan sa 1 mM hangtod 3 mM nga adunay agwat nga 0.5 mM aron mahibal-an ang labing kaarang sa Mg²⁺ konsentrasyon alang sa matag template ug pasiuna.

A-4 temperatura sa Annealing

Ang taas nga temperatura sa annealing nakaapekto sa pagbugkos sa pasiuna ug template. —— Kubusan ang temperatura sa annealing ug i-optimize ang kondisyon nga adunay gradient nga 2 ° C.

A-5 Oras sa pagdugang

■ Mubo nga oras sa pagdugang —— Dugangi ang oras sa pagpalugway.

T: Bakak nga positibo

Phenomena: Gipakita usab sa mga dili maayo nga sampol ang mga target band sa pagkakasunud-sunod.

A-1 Kontaminasyon sa PCR

■ Kontaminasyon sa krus sa target nga han-ay o mga produkto nga nagpadako —— Pag-amping nga dili pipet ang sampol nga adunay sulud nga target sa negatibo nga sampol o ibubo kini gikan sa centrifuge tube. Ang mga reagent o kagamitan kinahanglan nga autoclaved aron mawala ang mga kasamtangan nga mga nucleic acid, ug ang pagkaanaa sa kontaminasyon kinahanglan mahibal-an pinaagi sa mga eksperimento nga dili maayo nga pagkontrol.

■ Reagent nga kontaminasyon ——Ipagtapok ang mga reagent ug tipiganan sa mubu nga temperatura.

A-2 Punoanr

■ Mg²⁺ ang konsentrasyon sobra ra kaayo --— Husto nga pagdugang sa Mg²⁺ konsentrasyon: I-optimize ang Mg²⁺ konsentrasyon sa usa ka serye sa mga reaksyon gikan sa 1 mM hangtod 3 mM nga adunay agwat nga 0.5 mM aron mahibal-an ang labing kaarang sa Mg²⁺ konsentrasyon alang sa matag template ug pasiuna.

■ Dili sayup nga laraw sa pasiuna, ug ang han-ay sa gipunting nga adunay homology nga dili han-ay nga han-ay. —— Mga pasiuna nga pagdesinyo pag-usab.

T: Dili piho nga pagpadako

Phenomena: Ang mga PCR amplification band wala magkauyon sa gipaabot nga kadak-an, bisan dako o gamay, o usahay parehas nga parehas nga piho nga mga amplification band ug dili piho nga mga amplification band nga nahinabo.

A-1 nga Pasiuna

■ Dili maayo nga pagkasibo sa pasiuna

——Pag-una nga laraw sa laraw.

■ Ang pasiuna nga konsentrasyon sobra ka taas ——Ama nga pagdugang sa temperatura sa denaturation ug pagpahaba sa oras sa denaturasyon.

A-2 Mg²⁺ konsentrasyon

■ Ang Mg²⁺ ang konsentrasyon sobra ra kaayo --— Maayong pagbuhin ang konsentrasyon sa Mg2 +: I-optimize ang Mg²⁺ konsentrasyon sa usa ka serye sa mga reaksyon gikan sa 1 mM hangtod 3 mM nga adunay agwat nga 0.5 mM aron mahibal-an ang labing kaarang sa Mg²⁺ konsentrasyon alang sa matag template ug pasiuna.

A-3 Labing kainit nga polymerase

■ Sobra nga kantidad sa enzyme —— Pagminus sa angay nga kantidad sa enzyme sa gintang nga 0.5 U

A-4 temperatura sa Annealing

■ Lab-as kaayo ang temperatura sa annealing —— Tukma nga dugangan ang temperatura sa annealing o gamiton ang duha ka yugto nga annealing nga pamaagi

Mga siklo sa A-5 PCR

■ Daghang mga siklo sa PCR —— Bawasan ang gidaghanon sa mga siklo sa PCR.

T: Mga patch o smear band

A-1 nga Pasiuna——Masubo nga pagka-piho —— Pagdisenyo pag-usab sa pasiuna, pagbag-o sa posisyon ug gitas-on sa pasiuna aron mapaayo ang pagkasibo niini; o paghimo sa salag sa PCR.

A-2 Template nga DNA

——Dili puro ang template ——Putli ang template o kuhaa ang DNA nga adunay mga kit sa pagputli.

A-3 Mg²⁺ konsentrasyon

—— Mag²⁺ taas kaayo ang konsentrasyon ——Paayo nga ibanan ang Mg²⁺ konsentrasyon: I-optimize ang Mg²⁺ konsentrasyon sa usa ka serye sa mga reaksyon gikan sa 1 mM hangtod 3 mM nga adunay agwat nga 0.5 mM aron mahibal-an ang labing kaarang sa Mg²⁺ konsentrasyon alang sa matag template ug pasiuna.

A-4 dNTP

——Ang konsentrasyon sa mga dNTP sobra ka taas —— Kubusan ang konsentrasyon sa dNTP nga angay

A-5 temperatura sa pagpahiangay

—— Labihan ka mubu ang temperatura sa annealing —— Tukma nga dugangan ang temperatura sa annealing

A-6 Mga Siklo

—— Daghang siklo —— Kuhaa ang numero sa siklo

T: Pila ang template nga DNA nga kinahanglan idugang sa usa ka 50 μl PCR nga sistema sa reaksyon?

Q: Giunsa ang pagpadako sa taas nga mga tipik?

Ang una nga lakang mao ang pagpili sa angay nga polymerase. Ang regular nga Taq polymerase dili ma-proofread tungod sa kakulang sa 3'-5 'nga kalihokan nga exonuc please, ug ang dili magkatakdo nga kaayo makaminusan ang kahusayan sa extension sa mga tipik. Tungod niini, ang regular nga Taq polymerase dili epektibo nga makapadako sa mga tipik nga gipunting nga labaw sa 5 kb. Ang Taq polymerase nga adunay espesyal nga pagbag-o o uban pang taas nga pagkamaunongon nga polimerase kinahanglan pilion aron mapaayo ang kahusayan sa extension ug matubag ang mga panginahanglanon sa taas nga pagpadako sa tipik. Ingon kadugangan, ang pagpadako sa mga tag-as nga mga tipik nagkinahanglan usab og katugbang nga pag-ayo sa laraw sa pasiuna, oras sa denaturation, oras sa pagpalugway, buffer pH, ug uban pa. Kasagaran, ang mga primer nga adunay 18-24 bp mahimong mosangput sa labi ka maayo nga ani. Aron mapugngan ang kadaot sa template, ang oras sa denaturation sa 94 ° C kinahanglan ibanan sa 30 sec o mas mada kada siklo, ug ang oras nga motaas ang temperatura sa 94 ° C sa wala pa ang pagpadako kinahanglan mubu sa 1 ka minuto. Labut pa, ang pagbutang sa temperatura sa extension sa bahin sa 68 ° C ug pagdisenyo sa oras sa extension sumala sa rate nga 1 kb / min masiguro ang epektibo nga pagpadako sa mga tag-as nga mga tipik.

T: Giunsa mapaayo ang pagkamaunongon sa pagpadako sa PCR?

Ang sayup nga sayup sa pagpadako sa PCR mahimong maminusan pinaagi sa paggamit sa lainlaing mga DNA polymerase nga adunay taas nga pagkamaunongon. Taliwala sa tanan nga Taq DNA polymerases nga nakit-an hangtod karon, ang Pfu nga enzyme adunay labing ubos nga rate sa sayup ug labing kataas nga pagkamaunongon (tan-awa ang gilakip nga lamesa). Gawas sa pagpili sa enzyme, ang mga tigdukiduki mahimo nga labi nga makunhuran ang rate sa mutation sa PCR pinaagi sa pag-optimize sa mga kondisyon sa reaksyon, lakip ang pag-optimize sa komposisyon sa buffer, konsentrasyon sa labing kainit nga polymerase ug pag-optimize sa numero sa siklo sa PCR.

Isulat ang imong mensahe dinhi ug ipadala kini kanamo