Paspas nga Mutagenesis Kit sa Tigdumala sa Site

Paspas nga pagbag-o sa us aka site o multi-site sa target nga gene sa target nga vector.

Ang mutagenesis nga gitudlo sa site nga vitro usa ka hinungdanon nga pamaagi sa eksperimento sa lainlaing mga natad sa biology ug medisina, nga kadaghanan gigamit aron mausab ug ma-optimize ang mga target genes, susihon ang mga lugar nga adunay regulasyon sa mga tigpasiugda, ingon man usab tun-an ang komplikado nga relasyon tali sa istraktura ug paglihok sa protina. Gisagop sa kit ang karon nga nanguna nga teknolohiya aron direkta nga ipatuman ang us aka pagbag-o sa site, pagbag-o sa multi-site ingon man pagsulud o pagtangtang sa mutasyon sa gipunting nga gene. Ang mutation rate sa pag-mutate sa usa ka site mahimong moabut sa labaw sa 90%. Ingon kadugangan, dili sama sa tradisyonal nga mutate kit nga nanginahanglan daghang mga hugna sa PCR, sub-cloning ug uban pang mga lakang nga mogugol sa panahon ug pagtrabaho, ang operasyon sa kit mas simple, ug upat ra nga mga lakang ang gikinahanglan aron matukod ang mutant strain.

Iring Dili	Kadako sa pagpamutos
44992901	20 rxn

Magpadala email sa amon

Detalye sa Produkto

FAQ

Mga Tags sa Produkto

Mga dagway

■ Yano ug dali: Ang kit nagsagop sa dili hinablon nga teknolohiya sa pagpadako sa plasmid. Kinahanglan ra niini ang 4 nga mga lakang aron mahibal-an ang pagbag-o gikan sa ihalas nga tipo ngadto sa mutant strain, nga wala’y pag-usik sa oras ug pag-usik sa trabaho nga mga lakang sama sa daghang mga hugna sa PCR ug sub-cloning.
■ Pasiuna nga adunay kaayo nga pagkaepisyente: Gisulud sa kit ang prinsipyo sa dili bahin nga nagsapaw nga laraw sa pasiuna, aron daghang mga mutant plasmid ang makuha pinaagi sa pagpadako.
■ Malapad nga magamit: Ang kit dili mahimo nga magdala sa us aka site mutation, apan usab ang mutasyon sa multi-site. Mahimo kini mutate hangtod sa 5 nga mga site.
■ Kusog nga pagbag-o: Ang kit mahimong magdala sa pagbag-o sa direksyon sa site sa mga plasmid nga adunay labing kadako nga gidak-on nga 10 kb, sa panguna gitabonan ang tanan nga kasagarang gigamit nga mga plasmid.
■ Taas nga rate sa mutasyon: ang kit adunay function nga doble nga panghilis sa methylated plasmid template nga in vitro ug in vivo, pagsiguro sa labi ka taas nga mutation rate.

Pag-setup sa Reaksyon sa Site-Mutation ug Program sa PCR

■ Alang sa pagbag-o sa us aka primer nga multi-site mutation, ang rate sa mutation mahimong mas ubos kaysa us aka pag-mutate sa site tungod sa nagkadaghan nga mga mutation site. Pinauyon sa among datos nga pang-eksperimento, kung ang gidaghanon sa mga site sa mutasyon moabut sa 5, ang positibo nga rate sa mutasyon maminusan sa 50%. Busa, sa kini nga kaso, girekomenda nga dugangan ang gidaghanon sa mga gipanghimatuud nga mga clone.
■ Gisuportahan sa kit ang pagbag-o sa multi-site nga multi-primer, aron ang mga eksperimento sa mutasyon dungan nga mahimo sa usa ka labi ka daghang lahi. Ang kataas nga utlanan sa ihap sa mga mutation site 5 pa.
■ Gisugyot nga ang pagkontrol sa mga plasmid ug primer nga gihatag sa kit kinahanglan gamiton samtang nagdala sa bag-ong mga eksperimento sa mutasyon aron mapadali ang pagtuki sa mga problema sa eksperimento.

Fast Site-Directed Mutagenesis Kit

Ang tanan nga mga produkto mahimong ipasibo alang sa ODM / OEM. Alang sa mga detalye,palihug i-klik ang Customized Service (ODM / OEM)

Kaniadto: Mouse Tissue Direct PCR Kit

Sunod: 2 × Pfu PCR Mix

T: Wala’y mga band nga nagpadako

Usa ka 1 nga Sulundan

■ Ang template adunay sulud nga mga hugaw sa protina o mga tigpugong sa Taq, ug uban pa.

■ Ang denaturation sa template dili kompleto —— Tukma nga dugangan ang temperatura sa denaturation ug ipadugay ang oras sa denaturation.

■ Pagdaot sa template —— Pag-andam usab ang template.

A-2 Pasiuna

■ Dili maayo nga kalidad sa mga pasiuna—— Pag-usab sa synthesize sa pasiuna.

■ Panguna nga pagkadaut ——Ukubua ang mga pasiunang konsentrasyon sa gamay nga kadaghan aron mapreserba. Paglikay sa daghang pagyelo ug pagkatunaw o sa dugay nga 4 ° C cryopreserve.

■ Dili husto nga laraw sa mga primer (pananglitan ang gitas-on sa primer dili igo, dimer nga gihimo taliwala sa mga primer, ug uban pa) -Redesign primers (likayan ang pagporma sa primer dimer ug sekondarya nga istraktura)

A-3 Mg²⁺konsentrasyon

■ Mg²⁺ ang konsentrasyon sobra ra kaayo --— Husto nga pagdugang sa Mg²⁺konsentrasyon: I-optimize ang Mg²⁺ konsentrasyon sa usa ka serye sa mga reaksyon gikan sa 1 mM hangtod 3 mM nga adunay agwat nga 0.5 mM aron mahibal-an ang labing kaarang sa Mg²⁺ konsentrasyon alang sa matag template ug pasiuna.

A-4 temperatura sa Annealing

Ang taas nga temperatura sa annealing nakaapekto sa pagbugkos sa pasiuna ug template. —— Kubusan ang temperatura sa annealing ug i-optimize ang kondisyon nga adunay gradient nga 2 ° C.

A-5 Oras sa pagdugang

■ Mubo nga oras sa pagdugang —— Dugangi ang oras sa pagpalugway.

T: Bakak nga positibo

Phenomena: Gipakita usab sa mga dili maayo nga sampol ang mga target band sa pagkakasunud-sunod.

A-1 Kontaminasyon sa PCR

■ Kontaminasyon sa krus sa target nga han-ay o mga produkto nga nagpadako —— Pag-amping nga dili pipet ang sampol nga adunay sulud nga target sa negatibo nga sampol o ibubo kini gikan sa centrifuge tube. Ang mga reagent o kagamitan kinahanglan nga autoclaved aron mawala ang mga kasamtangan nga mga nucleic acid, ug ang pagkaanaa sa kontaminasyon kinahanglan mahibal-an pinaagi sa mga eksperimento nga dili maayo nga pagkontrol.

■ Reagent nga kontaminasyon ——Ipagtapok ang mga reagent ug tipiganan sa mubu nga temperatura.

A-2 Punoanr

■ Mg²⁺ ang konsentrasyon sobra ra kaayo --— Husto nga pagdugang sa Mg²⁺ konsentrasyon: I-optimize ang Mg²⁺ konsentrasyon sa usa ka serye sa mga reaksyon gikan sa 1 mM hangtod 3 mM nga adunay agwat nga 0.5 mM aron mahibal-an ang labing kaarang sa Mg²⁺ konsentrasyon alang sa matag template ug pasiuna.

■ Dili sayup nga laraw sa pasiuna, ug ang han-ay sa gipunting nga adunay homology nga dili han-ay nga han-ay. —— Mga pasiuna nga pagdesinyo pag-usab.

T: Dili piho nga pagpadako

Phenomena: Ang mga PCR amplification band wala magkauyon sa gipaabot nga kadak-an, bisan dako o gamay, o usahay parehas nga parehas nga piho nga mga amplification band ug dili piho nga mga amplification band nga nahinabo.

A-1 nga Pasiuna

■ Dili maayo nga pagkasibo sa pasiuna

——Pag-una nga laraw sa laraw.

■ Ang pasiuna nga konsentrasyon sobra ka taas ——Ama nga pagdugang sa temperatura sa denaturation ug pagpahaba sa oras sa denaturasyon.

A-2 Mg²⁺ konsentrasyon

■ Ang Mg²⁺ ang konsentrasyon sobra ra kaayo --— Maayong pagbuhin ang konsentrasyon sa Mg2 +: I-optimize ang Mg²⁺ konsentrasyon sa usa ka serye sa mga reaksyon gikan sa 1 mM hangtod 3 mM nga adunay agwat nga 0.5 mM aron mahibal-an ang labing kaarang sa Mg²⁺ konsentrasyon alang sa matag template ug pasiuna.

A-3 Labing kainit nga polymerase

■ Sobra nga kantidad sa enzyme —— Pagminus sa angay nga kantidad sa enzyme sa gintang nga 0.5 U

A-4 temperatura sa Annealing

■ Lab-as kaayo ang temperatura sa annealing —— Tukma nga dugangan ang temperatura sa annealing o gamiton ang duha ka yugto nga annealing nga pamaagi

Mga siklo sa A-5 PCR

■ Daghang mga siklo sa PCR —— Bawasan ang gidaghanon sa mga siklo sa PCR.

T: Mga patch o smear band

A-1 nga Pasiuna——Masubo nga pagka-piho —— Pagdisenyo pag-usab sa pasiuna, pagbag-o sa posisyon ug gitas-on sa pasiuna aron mapaayo ang pagkasibo niini; o paghimo sa salag sa PCR.

A-2 Template nga DNA

——Dili puro ang template ——Putli ang template o kuhaa ang DNA nga adunay mga kit sa pagputli.

A-3 Mg²⁺ konsentrasyon

—— Mag²⁺ taas kaayo ang konsentrasyon ——Paayo nga ibanan ang Mg²⁺ konsentrasyon: I-optimize ang Mg²⁺ konsentrasyon sa usa ka serye sa mga reaksyon gikan sa 1 mM hangtod 3 mM nga adunay agwat nga 0.5 mM aron mahibal-an ang labing kaarang sa Mg²⁺ konsentrasyon alang sa matag template ug pasiuna.

A-4 dNTP

——Ang konsentrasyon sa mga dNTP sobra ka taas —— Kubusan ang konsentrasyon sa dNTP nga angay

A-5 temperatura sa pagpahiangay

—— Labihan ka mubu ang temperatura sa annealing —— Tukma nga dugangan ang temperatura sa annealing

A-6 Mga Siklo

—— Daghang siklo —— Kuhaa ang numero sa siklo

T: Pila ang template nga DNA nga kinahanglan idugang sa usa ka 50 μl PCR nga sistema sa reaksyon?

Q: Giunsa ang pagpadako sa taas nga mga tipik?

Ang una nga lakang mao ang pagpili sa angay nga polymerase. Ang regular nga Taq polymerase dili ma-proofread tungod sa kakulang sa 3'-5 'nga kalihokan nga exonuc please, ug ang dili magkatakdo nga kaayo makaminusan ang kahusayan sa extension sa mga tipik. Tungod niini, ang regular nga Taq polymerase dili epektibo nga makapadako sa mga tipik nga gipunting nga labaw sa 5 kb. Ang Taq polymerase nga adunay espesyal nga pagbag-o o uban pang taas nga pagkamaunongon nga polimerase kinahanglan pilion aron mapaayo ang kahusayan sa extension ug matubag ang mga panginahanglanon sa taas nga pagpadako sa tipik. Ingon kadugangan, ang pagpadako sa mga tag-as nga mga tipik nagkinahanglan usab og katugbang nga pag-ayo sa laraw sa pasiuna, oras sa denaturation, oras sa pagpalugway, buffer pH, ug uban pa. Kasagaran, ang mga primer nga adunay 18-24 bp mahimong mosangput sa labi ka maayo nga ani. Aron mapugngan ang kadaot sa template, ang oras sa denaturation sa 94 ° C kinahanglan ibanan sa 30 sec o mas mada kada siklo, ug ang oras nga motaas ang temperatura sa 94 ° C sa wala pa ang pagpadako kinahanglan mubu sa 1 ka minuto. Labut pa, ang pagbutang sa temperatura sa extension sa bahin sa 68 ° C ug pagdisenyo sa oras sa extension sumala sa rate nga 1 kb / min masiguro ang epektibo nga pagpadako sa mga tag-as nga mga tipik.

T: Giunsa mapaayo ang pagkamaunongon sa pagpadako sa PCR?

Ang sayup nga sayup sa pagpadako sa PCR mahimong maminusan pinaagi sa paggamit sa lainlaing mga DNA polymerase nga adunay taas nga pagkamaunongon. Taliwala sa tanan nga Taq DNA polymerases nga nakit-an hangtod karon, ang Pfu nga enzyme adunay labing ubos nga rate sa sayup ug labing kataas nga pagkamaunongon (tan-awa ang gilakip nga lamesa). Gawas sa pagpili sa enzyme, ang mga tigdukiduki mahimo nga labi nga makunhuran ang rate sa mutation sa PCR pinaagi sa pag-optimize sa mga kondisyon sa reaksyon, lakip ang pag-optimize sa komposisyon sa buffer, konsentrasyon sa labing kainit nga polymerase ug pag-optimize sa numero sa siklo sa PCR.

Isulat ang imong mensahe dinhi ug ipadala kini kanamo