2 × Taq Platinum PCR Mix
Kahulugan sa kalihokan
1 nga yunit (U) Taq Platinum DNA Ang kalihokan sa Polymerase gihubit ingon nga kantidad nga gikinahanglan nga enzyme aron maapil ang 10 nmol deoxynucleotides sa dili masulud nga acid nga mga sangkap sa 74 ° C sulud sa 30 min nga gigamit ang gipalihok nga salmon sperm DNA ingon template / primer.
Pagpugong sa Kalidad
Ang kaputli pinaagi sa pagkakita sa SDS-PAGE labaw sa 99%; Wala’y kalihokan nga nakit-an nga exogenous nuclease; Ang usa ka kopya nga gene sa tawhanong genome mahimong epektibo nga madako; Wala’y hinungdan nga pagbag-o sa kalihokan kung gitipig sa temperatura sa kuwarto sa usa ka semana.
Panguna nga Mga Parameter nga Teknikal
Adunay kini nga kalihokan nga 5'-3 "exonuc please ug 3'-5" exonuc please nga kalihokan, ug ang kamatinud-anon niini sunod sa Pfu polymerase. Ang katulin sa extension sa Taq Platinum Polymerase mao ang tulin kaysa Pfu polymerase ug ang kahusayan sa pagpadako labi ka taas. Ang mga produkto sa PCR mahimong direkta nga ligated sa blunt end o i-clone sa TA vector. Kung kinahanglan nga mapaayo ang kahusayan sa pag-clone, girekomenda nga limpyohan una ug dugangan ang 3'-dA overhangs sa wala pa pag-clone sa TA vector.
Usa ka tubo nga Taq Platinum MasterMix (National High-Tech Product Certification)
■ Ang Taq Platinum MasterMix nagpalambo sa pagkapiho ug pagkasensitibo sa reaksyon sa PCR ug makapadako sa mga komplikado nga template nga adunay taas nga sulud sa GC, ikaduhang istraktura ug uban pa. Ingon ka ubos sa 2 nga mga kopya sa target nga template mahimong mapadako, nga masiguro ang labi ka tukma nga mga resulta sa eksperimento.
■ Ang talagsaon nga pormula nga Taq Platinum MasterMix naghimo sa tibuuk nga sistema sa reaksyon nga lig-on kaayo, ug ang kalihokan dili maapektohan sa balik-balik nga freeze-thaw o dugay nga pagtipig sa 4 ° C.
Ang lig-on ug episyente nga paandam nga daan nga PCR nga sagol nga solusyon makahimo sa operasyon nga dali ug yano, labi nga makunhuran ang kusog sa pagtrabaho ug sayup sa sampling. Ang high-performance PCR enhancer ug optimizer giapil usab sa pagsagol, nga nagpaminus sa mga kinahanglanon sa mga kondisyon sa PCR.
■ Kini nga produkto adunay parehas nga sistema nga adunay sulud nga tina ug wala’y tina. Ang mga produkto nga adunay MasterMix nga adunay tina mahimong direkta nga makuryente human sa PCR, nga wala’y pagdugang loading buffer.
Mga aplikasyon
Mahimo kini baylohan ang Pfu polymerase aron mapadako ang taas nga mga produkto sa pagkamaunongon gikan sa mga komplikado nga template sama sa genome, ug kini angayan alang sa mga aplikasyon sama sa pag-clone sa ekspresyon nga mga gen, pagbag-o sa piho nga site ug pagtuki sa us aka nucleotide polymorphism (SNP), ug uban pa.
Paglikay sa Paglaraw Mga Primer sa PCR:
Ang gitas-on sa primer kasagaran 20-25 mer. Bisan pa, kung naghimo sa taas nga fragment PCR, ang pasiuna nga gitas-on kinahanglan dugangan sa 30-35 mer.
Wala'y komplementaryong pagpares sa taliwala sa duha nga primer, labi na alang sa katapusang 3 nga mga base sa katapusan nga 3 ′.
■ Ang sulud sa GC kinahanglan nga 50-60%, ug likayan ang lokal nga adunahan nga GC o AT. Aron mahimo’g lig-on ang pagbutang primer ug template, likayi ang dato nga istraktura sa katapusan nga 3 ′.
■ Paglikay sa pasiuna aron maporma ang ikaduha nga istruktura.
■ Pagpili duha nga primer nga adunay temperatura sa Tm nga hapit sa usag usa.
Pagkalkula sa Tm Value sa Mga Primer alang sa PCR:
■ Kung ang pasiuna dili mubu sa 20 mer: Tm = 2 ° C × (A + T) + 4 ° C × (G + C).
■ Kung ang pasiuna labaw sa 20 mer: Tm = 81.5 + 0.41 × (GC%) - 600 / L, diin ang L ang gitas-on sa pasiuna.
■ Ibutang ang temperatura sa annealing sa (Tm-5) ° C.
Pag-input sa PCR Primer
Ang angay nga katapusang konsentrasyon sa mga primer mahimong mapili taliwala sa 0.1 μM ug 1.0 μM. Ang sobra ka gamay nga konsentrasyon sa pasiuna mosangput sa mubu nga abot sa mga produkto nga nagpadako, samtang ang sobra ka taas nga konsentrasyon sa pasiuna labi ka dali madut-an sa dili piho nga pagpadako. Kasagaran, kung ang kadaghan sa template nga DNA dako o komplikado nga template nga DNA (sama sa DNA sa genome sa tawo) gigamit ingon usa ka template, ang pasiuna nga konsentrasyon kinahanglan nga mas ubos. Kung ang kadaghan sa template DNA gamay o yano nga template DNA (pananglitan, plasmid DNA, ug uban pa) gigamit ingon usa ka template, ang pasiuna nga konsentrasyon kinahanglan nga mas taas.
Ang tanan nga mga produkto mahimong ipasibo alang sa ODM / OEM. Alang sa mga detalye,palihug i-klik ang Customized Service (ODM / OEM)
  |
Paggamit genomic DNA ingon template aron mapadako ang tipik nga 1 kb. Pagkahuman sa reaksyon sa PCR, pagkuha 5 μl alang sa pagkakita sa electrophoresis. |
Usa ka 1 nga Sulundan
■ Ang template adunay sulud nga mga hugaw sa protina o mga tigpugong sa Taq, ug uban pa.
■ Ang denaturation sa template dili kompleto —— Tukma nga dugangan ang temperatura sa denaturation ug ipadugay ang oras sa denaturation.
■ Pagdaot sa template —— Pag-andam usab ang template.
A-2 Pasiuna
■ Dili maayo nga kalidad sa mga pasiuna—— Pag-usab sa synthesize sa pasiuna.
■ Panguna nga pagkadaut ——Ukubua ang mga pasiunang konsentrasyon sa gamay nga kadaghan aron mapreserba. Paglikay sa daghang pagyelo ug pagkatunaw o sa dugay nga 4 ° C cryopreserve.
■ Dili husto nga laraw sa mga primer (pananglitan ang gitas-on sa primer dili igo, dimer nga gihimo taliwala sa mga primer, ug uban pa) -Redesign primers (likayan ang pagporma sa primer dimer ug sekondarya nga istraktura)
A-3 Mg2+konsentrasyon
■ Mg2+ ang konsentrasyon sobra ra kaayo --— Husto nga pagdugang sa Mg2+ konsentrasyon: I-optimize ang Mg2+ konsentrasyon sa usa ka serye sa mga reaksyon gikan sa 1 mM hangtod 3 mM nga adunay agwat nga 0.5 mM aron mahibal-an ang labing kaarang sa Mg2+ konsentrasyon alang sa matag template ug pasiuna.
A-4 temperatura sa Annealing
Ang taas nga temperatura sa annealing nakaapekto sa pagbugkos sa pasiuna ug template. —— Kubusan ang temperatura sa annealing ug i-optimize ang kondisyon nga adunay gradient nga 2 ° C.
A-5 Oras sa pagdugang
■ Mubo nga oras sa pagdugang —— Dugangi ang oras sa pagpalugway.
Phenomena: Gipakita usab sa mga dili maayo nga sampol ang mga target band sa pagkakasunud-sunod.
A-1 Kontaminasyon sa PCR
■ Kontaminasyon sa krus sa target nga han-ay o mga produkto nga nagpadako —— Pag-amping nga dili pipet ang sampol nga adunay sulud nga target sa negatibo nga sampol o ibubo kini gikan sa centrifuge tube. Ang mga reagent o kagamitan kinahanglan nga autoclaved aron mawala ang mga kasamtangan nga mga nucleic acid, ug ang pagkaanaa sa kontaminasyon kinahanglan mahibal-an pinaagi sa mga eksperimento nga dili maayo nga pagkontrol.
■ Reagent nga kontaminasyon ——Ipagtapok ang mga reagent ug tipiganan sa mubu nga temperatura.
A-2 Punoanr
■ Mg2+ ang konsentrasyon sobra ra kaayo --— Husto nga pagdugang sa Mg2+ konsentrasyon: I-optimize ang Mg2+ konsentrasyon sa usa ka serye sa mga reaksyon gikan sa 1 mM hangtod 3 mM nga adunay agwat nga 0.5 mM aron mahibal-an ang labing kaarang sa Mg2+ konsentrasyon alang sa matag template ug pasiuna.
■ Dili sayup nga laraw sa pasiuna, ug ang han-ay sa gipunting nga adunay homology nga dili han-ay nga han-ay. —— Mga pasiuna nga pagdesinyo pag-usab.
Phenomena: Ang mga PCR amplification band wala magkauyon sa gipaabot nga kadak-an, bisan dako o gamay, o usahay parehas nga parehas nga piho nga mga amplification band ug dili piho nga mga amplification band nga nahinabo.
A-1 nga Pasiuna
■ Dili maayo nga pagkasibo sa pasiuna
——Pag-una nga laraw sa laraw.
■ Ang pasiuna nga konsentrasyon sobra ka taas ——Ama nga pagdugang sa temperatura sa denaturation ug pagpahaba sa oras sa denaturasyon.
A-2 Mg2+ konsentrasyon
■ Ang Mg2+ ang konsentrasyon sobra ra kaayo --— Maayong pagbuhin ang konsentrasyon sa Mg2 +: I-optimize ang Mg2+ konsentrasyon sa usa ka serye sa mga reaksyon gikan sa 1 mM hangtod 3 mM nga adunay agwat nga 0.5 mM aron mahibal-an ang labing kaarang sa Mg2+ konsentrasyon alang sa matag template ug pasiuna.
A-3 Labing kainit nga polymerase
■ Sobra nga kantidad sa enzyme —— Pagminus sa angay nga kantidad sa enzyme sa gintang nga 0.5 U
A-4 temperatura sa Annealing
■ Lab-as kaayo ang temperatura sa annealing —— Tukma nga dugangan ang temperatura sa annealing o gamiton ang duha ka yugto nga annealing nga pamaagi
Mga siklo sa A-5 PCR
■ Daghang mga siklo sa PCR —— Bawasan ang gidaghanon sa mga siklo sa PCR.
A-1 nga Pasiuna——Masubo nga pagka-piho —— Pagdisenyo pag-usab sa pasiuna, pagbag-o sa posisyon ug gitas-on sa pasiuna aron mapaayo ang pagkasibo niini; o paghimo sa salag sa PCR.
A-2 Template nga DNA
——Dili puro ang template ——Putli ang template o kuhaa ang DNA nga adunay mga kit sa pagputli.
A-3 Mg2+ konsentrasyon
—— Mag2+ taas kaayo ang konsentrasyon ——Paayo nga ibanan ang Mg2+ konsentrasyon: I-optimize ang Mg2+ konsentrasyon sa usa ka serye sa mga reaksyon gikan sa 1 mM hangtod 3 mM nga adunay agwat nga 0.5 mM aron mahibal-an ang labing kaarang sa Mg2+ konsentrasyon alang sa matag template ug pasiuna.
A-4 dNTP
——Ang konsentrasyon sa mga dNTP sobra ka taas —— Kubusan ang konsentrasyon sa dNTP nga angay
A-5 temperatura sa pagpahiangay
—— Labihan ka mubu ang temperatura sa annealing —— Tukma nga dugangan ang temperatura sa annealing
A-6 Mga Siklo
—— Daghang siklo —— Kuhaa ang numero sa siklo
Ang una nga lakang mao ang pagpili sa angay nga polymerase. Ang regular nga Taq polymerase dili ma-proofread tungod sa kakulang sa 3'-5 'nga kalihokan nga exonuc please, ug ang dili magkatakdo nga kaayo makaminusan ang kahusayan sa extension sa mga tipik. Tungod niini, ang regular nga Taq polymerase dili epektibo nga makapadako sa mga tipik nga gipunting nga labaw sa 5 kb. Ang Taq polymerase nga adunay espesyal nga pagbag-o o uban pang taas nga pagkamaunongon nga polimerase kinahanglan pilion aron mapaayo ang kahusayan sa extension ug matubag ang mga panginahanglanon sa taas nga pagpadako sa tipik. Ingon kadugangan, ang pagpadako sa mga tag-as nga mga tipik nagkinahanglan usab og katugbang nga pag-ayo sa laraw sa pasiuna, oras sa denaturation, oras sa pagpalugway, buffer pH, ug uban pa. Kasagaran, ang mga primer nga adunay 18-24 bp mahimong mosangput sa labi ka maayo nga ani. Aron mapugngan ang kadaot sa template, ang oras sa denaturation sa 94 ° C kinahanglan ibanan sa 30 sec o mas mada kada siklo, ug ang oras nga motaas ang temperatura sa 94 ° C sa wala pa ang pagpadako kinahanglan mubu sa 1 ka minuto. Labut pa, ang pagbutang sa temperatura sa extension sa bahin sa 68 ° C ug pagdisenyo sa oras sa extension sumala sa rate nga 1 kb / min masiguro ang epektibo nga pagpadako sa mga tag-as nga mga tipik.
Ang sayup nga sayup sa pagpadako sa PCR mahimong maminusan pinaagi sa paggamit sa lainlaing mga DNA polymerase nga adunay taas nga pagkamaunongon. Taliwala sa tanan nga Taq DNA polymerases nga nakit-an hangtod karon, ang Pfu nga enzyme adunay labing ubos nga rate sa sayup ug labing kataas nga pagkamaunongon (tan-awa ang gilakip nga lamesa). Gawas sa pagpili sa enzyme, ang mga tigdukiduki mahimo nga labi nga makunhuran ang rate sa mutation sa PCR pinaagi sa pag-optimize sa mga kondisyon sa reaksyon, lakip ang pag-optimize sa komposisyon sa buffer, konsentrasyon sa labing kainit nga polymerase ug pag-optimize sa numero sa siklo sa PCR.
Mga kategorya sa mga produkto
NGANONG PILIHON KAMI
Sukad sa pagkatukod niini, ang among pabrika nagpalambo sa una nga mga produkto sa klase sa kalibutan nga nagsunod sa prinsipyo
sa kalidad una. Ang among mga produkto nakakuha maayo nga reputasyon sa industriya ug valuabletrusty taliwala sa mga bag-o ug daan nga kustomer ..
- Tel: +86 010-59822688
- Ang Building 5, No. 86, Shuangying West Road, Changping District, Beijing.
- people@tiangen.com
